豆科植物中結瘤信號通路蛋白NSP2相互作用蛋白IPN的功能分析.pdf

1、豆科植物和根瘤菌建立共生關系，形成新的植物器官根瘤，為植物提供可利用的氮源。豆科植物和根瘤菌之間的相互作用包括根瘤菌的侵染，根瘤原基的形成和固氮根瘤的形成，都受到宿主的嚴格調控。近幾年來，從模式豆科植物百脈根和苜蓿中鑒定出一系列參與結瘤因子感知和信號傳導的關鍵基因。其中，結瘤信號通路蛋白NSP1和NSP2是共生信號轉導途徑中關鍵的信號蛋白，都屬于GRAS家族轉錄因子。為了研究這類轉錄因子在根瘤形成過程中的調控機制，本文在從百脈根中分離到

2、與LjNSP2相互作用蛋白LjIPN2的基礎上，開展了苜蓿中與LjIPN2同源物MtIPN2的功能及作用機制研究，具體研究結果如下:
　　1.用LjIPN2的核苷酸序列在http://www.medicagohapmap.org/網(wǎng)站中做BLAST比對分析，在苜蓿中發(fā)現(xiàn)兩個同源基因，分別命名MtIPN2和MtILK。在NCBI(National Center for Biotechnology Information)網(wǎng)站用MtI

3、PN2和MtILK的氨基酸序列做BLAST比對發(fā)現(xiàn)，它們同屬于MYB-like轉錄因子家族，含有一個單個重復的MYB類結合DNA的結構域和一個預測的coiled-coil二聚化結構域。
　　2.對MtNSP2、MtIPN2和MtILK相應結構域進行截短，利用酵母雙雜交結果表明，MtNSP2含有所有四個結構域(LHR1、VHIID、LHR2和SH2-like)的截短能與MtIPN2和MtILK的相互作用;而MtIPN2和MtILK的

4、保守（結構域MYB和coiled-coil結構域）能夠與MtNSP2相互作用。
　　3.BiFC結果，進一步驗證了MtIPN2和MtILK與MtNSP2的相互作用，在植物細胞內，MtIPN2和MtILK能夠與MtNSP2相互作用，但是不能與MtNSP2E232K相互作用。
　　4.mcBiFC結果，證明了在同一個植物細胞中MtNSP2與MtNSP1相互作用形成異源二聚體的同時，還能夠和MtIPN2或MtILK相互作用，形成三