應用組織芯片技術對基質金屬蛋白酶7（MMP-7），基質金屬蛋白酶9（MMP-9）與人結直腸癌腹腔轉移的相關性研究.pdf

1、目的：研究基質金屬蛋白酶7(MMP-7)，基質金屬蛋白酶9(MMP-9)在人結直腸癌(colorectal carcinoma,CRC)中的表達情況，以探討其在人結直腸癌腹腔轉移中的相關作用，為其在人結直腸癌腹腔轉移相關預測及監(jiān)測診斷性研究以及抗人結直腸癌藥物的治療性研究提供理論基礎，并初步探討組織芯片免疫組織化學在人結直腸癌相關指標檢測中的應用。人結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，盡管對其采取了以手術為主的綜合性治療，但因缺乏有效的早期

2、診斷標準及抗轉移治療靶點，患者預后仍不佳。因此，深入研究控制人結直腸癌發(fā)生發(fā)展過程的關鍵基因的表達變化及其作用，將為其早期診斷預后判斷和抗轉移治療提供理論依據(jù)。 基質金屬蛋白酶7(MMP-7)和金屬蛋白酶9(MMP-9)對細胞外基質成分具有廣泛的降解作用，與多數(shù)腫瘤的侵襲轉移密切相關。但有關其協(xié)同表達及其意義的研究國外報道較少，國內還未見報道。 組織芯片(tissue chip)又稱組織微陣列(tissue microa

3、rrays，TMA)，是將數(shù)十至上千個小組織整齊地排放在一張載玻片上而制成的組織切片。1998年，Kononen等首次提出了組織芯片的概念，并制作了乳腺癌的組織微陣列，應用熒光原位雜交、免疫組織化學和mRNA原位雜交技術研究了6種基因及其表達產物的表達狀態(tài)，不但發(fā)現(xiàn)這些指標與乳腺癌的預后密切相關，而且與大組織的檢測結果完全一致。組織芯片的誕生為醫(yī)學病理學提供了一種高通量、大樣本以及快速的分子水平的分析工具。此以后，組織芯片技術得到了迅速

4、發(fā)展。國內外發(fā)表的組織芯片技術相關報道已有近千篇。這樣用同一套組織芯片即可迅速的對上百種生物分子標記(如抗原,DNA和RNA)進行分析、檢測。因此組織芯片技術是建立疾病，特別是腫瘤的生物分子文庫的強有力的工具。為此，本實驗擬應用組織芯片技術，采用免疫組織化學方法對12例正常大腸黏膜，50例伴有腹腔轉移腺癌組織，48例無腹腔轉移腺癌組織的MMP-7，MMP-9的表達進行檢測，旨在探討MMP-7，MMP-9對大腸癌發(fā)生和腹腔轉移的影響及其機

5、制。 方法：本實驗分為三部分。 1.收集河北醫(yī)科大學附屬第四病院外二科2006-2007年住院病人98例CRC原發(fā)灶和12例正常大腸黏膜的石蠟標本，使用組織陣列儀(personaltis suear rayer)制作成組織芯片(也稱組織微陣列，tissue microarray)共3塊。 2.采用抗生物素蛋白一過氧化酶(SP)法，對組織芯片進行免疫組織化學染色，并評估MMP-7，MMP-9的表達情況。尋找與CRC

6、腹腔轉移密切相關腫瘤標記物。 3.用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，以P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異非常顯著。比較有腹腔轉移腺癌與無腹腔轉移腺癌之間MMP-7，MMP-9的表達差異。 結果： 1.制備了組織芯片蠟塊3塊，每個蠟塊可切片成70-100張組織芯片玻片，供免疫組織化學檢測及今后研究使用。在制片、染色過程中組織芯片上有部分組織塊出現(xiàn)移位或脫失，可供統(tǒng)計分析的有96例。 2.MM